丙酮酸(PA)含量檢測(cè)試劑盒

丙酮酸(PA)含量檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)
可見(jiàn)分光光度法

注意：正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定。
貨號(hào)：BC2200
規(guī)格：50T/48S

產(chǎn)品內(nèi)容：
提取液：液體50mL×1 瓶，4℃保存；
試劑一：液體9mL×1 瓶， 4℃保存；
試劑二：液體50mL×1 瓶， 4℃保存；
丙酮酸鈉標(biāo)準(zhǔn)液，1mg/mL：液體1mL×1瓶， 4℃保存。

產(chǎn)品說(shuō)明：
丙酮酸通過(guò)乙酰CoA 連接葡萄糖、脂肪酸和氨基酸三大代謝，起著重要的樞紐作用。
丙酮酸與2,4-二硝基苯肼作用，生成丙酮酸-2,4-二硝基苯腙，在堿性溶液中呈櫻紅色。

需自備的儀器和用品：
可見(jiàn)分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1 mL 玻璃比色皿、研缽、冰、蒸餾水。

操作步驟：
一、丙酮酸提取：
1、 細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104 個(gè)）：提取液體積（mL）為500~1000：1 的比例（建議500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL 提取液），超聲波破碎（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30 次），靜置30min，8000g，常溫離心10min，取上清待測(cè)。
2、 組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10 的比例（建議稱取約0.1g 組織，加入1mL提取液），進(jìn)行冰浴勻漿，靜置30min，8000g，常溫離心10min，取上清待測(cè)。
3、 血清（漿）樣品：按照血清（漿）體積（mL）：提取液體積(mL)為1：5~10 的比例（建議取0.1mL血清（漿）加入1mL 提取液），進(jìn)行冰浴勻漿，靜置30min，8000g，常溫離心10min，取上清待測(cè)。
4、 標(biāo)準(zhǔn)品的準(zhǔn)備：將標(biāo)準(zhǔn)品用蒸餾水稀釋100、50、25、12.5、6.25、3.125、1.5625、0?g/ml。

二、測(cè)定步驟：
1、 分光光度計(jì)預(yù)熱30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)520nm，蒸餾水調(diào)零。
2、 取300μL標(biāo)準(zhǔn)品或樣本+100μL 試劑一于1.5mL EP 管中，混勻，靜置2min，加入500μL 試劑二，混勻，于520nm 波長(zhǎng)處測(cè)定吸光值A(chǔ)。
三、丙酮酸含量計(jì)算：
1、 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品濃度和測(cè)定值建立標(biāo)準(zhǔn)曲線；y為丙酮酸鈉含量（μg/mL），x為吸光值。
2、 按照血清（漿）體積計(jì)算
丙酮酸含量（μg/mL）= (y×V1)÷（V3×V1÷V2）=y×10
3、 按照蛋白濃度計(jì)算
丙酮酸含量（μg/mg prot）=(y×V1)÷(V1×Cpr)=y ÷Cpr
4、 按照樣品質(zhì)量計(jì)算
丙酮酸含量（μg/g 鮮重）= (y×V1)÷(W ×V1÷V2）=y÷W
5、 按照細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算
丙酮酸含量（μg/104 cell）＝(y×V1)÷（500×V1÷V2）= y÷500

V1：加入反應(yīng)體系中樣本體積，0.3mL；
V2：加入提取液體積，1 mL；
V3：加入血清（漿）體積，0.1 mL；
Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；
W：樣本質(zhì)量，g；
500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500 萬(wàn)。

相關(guān)文獻(xiàn)：

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