1M Hepes（pH7.2-7.4）

 HEPES緩沖液是細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中經(jīng)常用到的緩沖液。在開(kāi)放式的培養(yǎng)條件中，加入HEPES緩沖液，可防止培養(yǎng)基內(nèi)pH氧化升高，從而將PH維持在7.0左右。那么，HEPES緩沖液的配制步驟和方法是怎樣的，下面就給大家詳細(xì)介紹。
HEPES分子量為238.31，分子式: C8H18N2O4S。
HEPES常用于生物緩沖劑，pH值緩沖范圍：6.8-8.2，用在生化診斷試劑盒、DNA/rna提取試劑盒及PCR診斷試劑盒里。對(duì)細(xì)胞無(wú)毒性作用。它是一種氫離子緩沖劑，能較長(zhǎng)時(shí)間控制恒定的pH范圍。使用終濃度為10-50mmol/L。
關(guān)于HEPES 緩沖溶液的配制，不同的文獻(xiàn)資料有不同的說(shuō)法。根據(jù)用途，一種是單純的HEPES+NaOH，另一種是HEPES+鹽。各種配制方法總結(jié)如下：
一、500ml 1 M HEPES, pH = 7.0 Stock solution的配制
119.15 g HEPES 溶解在400ml蒸餾水中，加0.5~1M 的NaOH水溶液調(diào)節(jié)少所需pH(HEPES的有效pH 范圍是6.8~8.2)，然后用蒸餾水定容500ml，于4攝氏度保存。
二、加少量鹽的HEPES Buffer配方(500ml)
HEPES 6.5g、NaCl 8.0g、Na2HPO4.7H2O 0.198g、用0.5M NaOH 水溶液調(diào)節(jié)pH值，后定容。
三、2×HEPES緩沖鹽溶液的配制
將1.6g NaCl、0.074g KCl、0.027g Na2HPO4.2H2O、0.2g葡聚糖(glucan or dextran)和1g HEPES溶解在90ml的蒸餾水，用0.5M NaOH調(diào)節(jié)所需pH值，再用蒸餾水定容100ml即可。

用途：對(duì)細(xì)胞無(wú)毒性作用。它是一種氫離子緩沖劑，能較長(zhǎng)時(shí)間控制恒定的pH范圍。使用終濃度為10-50mmol/L，一般培養(yǎng)液內(nèi)含20mmol/LHEPES即可達(dá)到緩沖能力。

細(xì)胞培養(yǎng)常用10mmol/L。

1M Hepes（pH7.2-7.4）

10mmol/L HEPES緩沖液配制方法如下：準(zhǔn)確稱取HEPES 2.383g，加入新鮮三蒸水定容1L。過(guò)濾除菌，分裝后4℃保存。如果用于加入細(xì)胞培養(yǎng)液中作緩沖劑，建議培養(yǎng)液避光保存，因?yàn)橛醒芯繄?bào)道培養(yǎng)液中的HEPES在可見(jiàn)光下暴露3h以上將產(chǎn)生對(duì)細(xì)胞有毒性的過(guò)氧化氫。

HEPES 即羥乙基呱嗪乙硫磺酸（N’-a-hydroxythylpiperazine-N’-ethanesulfanic acid ）是一種氫離子緩沖劑，能較長(zhǎng)時(shí)間控制恒定的 pH 范圍。有效緩沖范圍為 pH6.8-8.2。常用于配制蛋白提取緩沖液、細(xì)胞培養(yǎng)用緩沖液等。

HEPES 用于細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)使用終濃度為 10-25mM， 在開(kāi)放式培養(yǎng)或細(xì)胞觀察時(shí)能維持較恒定的 PH 值。索萊寶生產(chǎn)的 HEPES 緩沖液均經(jīng)過(guò)無(wú)菌處理，可直接用于細(xì)胞培養(yǎng)。4℃保存可延長(zhǎng)產(chǎn)品保質(zhì)期，長(zhǎng)期不用建議低溫保存。

參考文獻(xiàn)：

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《Traditional Herbal Medicine-Derived Sulforaphene LFS-01 Reverses Colitis in Mice by Selectively Altering the Gut Microbiota and Promoting Intestinal Gamma-Delta T Cells》 作者:Ming Li, Jiali Gao, Yan Tang, Meishuo Liu, Sijin Wu, Kunli Qu, Xiangyu Long, Huajun Li, Min Li, Yinhui Liu, Jieli Yuan, Lei Mao, Yu Liu, Xiliang Zheng, Erkang Wang, Jin Wang and Yongliang Yang 期刊:Frontiers in Spotlight 影響因子:4.259 PMID:29375374
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