細胞凋亡檢測試劑盒ANNEXIN V-FITC/PI 

貨號： CA1020
規(guī)格： 20T/50T/100T
保存：貯存于 2-8°C，復檢期為一年。建議 Annexin V-FITC 打開后，分裝成小份凍存于-20°C。
產品說明：細胞凋亡是細胞的基本特征之一，在機體的胚胎發(fā)育、組織修復、內環(huán)境的穩(wěn)定等方面都起到十分重要
的作用。 Annexin V 是一種分子量為 35.8 KD 的 Ca2+
依賴性磷脂結合蛋白，能與細胞凋亡過程中翻轉到膜外的
磷脂酰絲氨酸（Phosphatidylserine, PS）高親和力特異結合。FITC-Annexin V 結合到凋亡細胞后，在藍色光的
激發(fā)下，發(fā)出綠色熒光，區(qū)分出凋亡細胞與正常細胞。碘化丙啶（Propidium  iodide，PI）是一種核酸染料，
它不能穿透完整細胞膜，但對凋亡晚期細胞和死細胞的破損細胞膜能夠穿透，并使細胞核紅染。將
FITC-Annexin V 與 PI 匹配使用，可以將凋亡早期的細胞和晚期的細胞區(qū)分開來。
細胞凋亡檢測試劑盒ANNEXIN V-FITC/PI操作步驟: 
 1.  調整待測細胞的濃度為 5×10五次方-1×10六次方個/ml。
 2.  取 1ml 細胞，1000rpm，4℃離心 10 分鐘，棄上清。
 3.  加入 1ml 預冷的 PBS，輕輕震蕩使細胞懸浮，1000rpm，4℃離心 10 分鐘，棄上清（對于貼壁細胞，先用胰酶消化，再用 PBS 洗滌）。
 4.  重復步驟 3 兩次。
 5.  將細胞重懸于 200µl Binding Buffer。
 6.  加入 10µl Annexin V-FITC 和 10µl PI，輕輕混勻，避光室溫反應 15 分鐘  或 4℃反應 30  分鐘。
 7.  加入 300µl Binding Buffer，在 1 小時內用流式細胞儀檢測。
 8.  若用熒光顯微鏡檢測，將細胞混合液離心，取細胞沉淀涂片，再進行觀察。
注意事項:  : :  : 
為保證得到理想的實驗結果在使用此試劑盒之前請認真閱讀該注意事項。
 1.旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內壁上的液體甩管底，避免開蓋時液體灑落。
 2.Annexin V-FITC 和 Propidium iodide 是光敏物質，在保存與操作時請注意避光。
 3.Propidium iodide（PI）能通過皮膚吸收，對眼睛有刺激作用。
 4.在細胞洗滌的后一步，請盡量將上清棄凈，以免 PBS 殘留影響實驗結果。
 5.PI 染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高，建議行 Annexin V-FITC 染色，上機前 5 分鐘再
加入 PI 染色。
產品內容: :: :  CA1020-20  CA1020-50  CA1020-100
Annexin V-FITC  200µl  500µl  1000µl
Binding   Buffer  12ml  30ml  60ml
Propidium iodide(PI)  200µl  500µl  1000µl
 6.整個操作過程動作要盡量輕柔，勿用力吹打細胞，盡量在 4℃下操作。
 7.反應完畢后請盡快檢測，因為細胞凋亡是一個動態(tài)的過程，反應 1 小時后熒光強度就開始衰變。
 8.成功的檢測凋亡受以下幾種因素的影響，如細胞類型、細胞膜上 PS 的密度、發(fā)生凋亡時 PS 翻轉的比
例、誘導細胞凋亡的方法、所用試劑、誘導凋亡的時間等，把這些影響因素進行優(yōu)化對實驗成功是非常必要
的。
此試劑盒僅供科研使用。

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