Q1

什么是脂類？

脂類是脂肪和類脂（磷脂、糖脂、固醇脂等）的統(tǒng)稱，它是構(gòu)成人體組織的正常成分，不溶于水而易溶于酒精等脂溶劑中。脂類與蛋白質(zhì)、碳水化合物是人體的三大營養(yǎng)素，其主要功能是儲能和供能。

脂滴（Lipid Droplet）是中性脂（主要為甘油三酯和酯化膽固醇）的主要貯存場所，是脂肪細(xì)胞的主要成分。正常情況下，除脂肪細(xì)胞以外，常規(guī)細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)不見或僅能看到微量脂滴。

Q2

為什么要進(jìn)行脂類染色？

Q3

常用的脂類染色方法有哪些？

目前常用于脂類染色的有經(jīng)典蘇丹染色、油紅O染色以及尼羅紅熒光染色。脂類染色常規(guī)適用樣本包含速凍、冰凍的動植物切片以及成脂誘導(dǎo)培養(yǎng)細(xì)胞。

經(jīng)典蘇丹染料包括蘇丹Ⅲ、蘇丹Ⅳ和蘇丹黑B，是常用的經(jīng)典脂質(zhì)染料，可顯示動物組織的脂質(zhì)積累和植物組織的木栓化，也可用于掩蓋組織脂褐素的自發(fā)熒光。

油紅O屬于新一代蘇丹脂質(zhì)染料，其著色較經(jīng)典染色法更深，特異性也更好。在觀察動脈粥樣硬化斑塊以及肝臟和肌肉脂質(zhì)積累方面具有很好的效用。G1263型改良油紅O染色試劑盒（環(huán)保型）在經(jīng)典異丙醇法的基礎(chǔ)上進(jìn)行了優(yōu)化更新，解決了染色液易揮發(fā)、染料易沉淀的關(guān)鍵難題，極大的降低了染色難度。

尼羅紅能與脂類物質(zhì)結(jié)合并發(fā)出熒光，在530 nm波長激發(fā)下，顯示強(qiáng)烈桔紅色熒光。染色過程中基本不含有機(jī)試劑，對微小脂滴的定位和顯示效果較好。可用于組織切片和培養(yǎng)細(xì)胞的脂類染色，對脂滴進(jìn)行原位標(biāo)記，并可搭配DAPI進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察。

Q4

非常規(guī)的脂類染色方法有哪些？

Q5

樣本如何固定以及染色后如何封片？

固定：樣本可不固定直接切片染色，如需固定則不能使用高濃度小分子醇、酮類的固定液固定，如丙酮和甲醇、乙醇會將脂滴從切片上洗脫從而不利于脂質(zhì)染色，建議使用甲醛類水性固定液，甲醛固定對組織形態(tài)保存效果更佳。

封片：對于組織切片和細(xì)胞爬片，可以使用S2150甘油明膠、抗熒光衰減封片劑等水性封片劑封片，封片后及時(shí)拍照留存；對于培養(yǎng)板細(xì)胞，建議染色、清洗后不要晾干，使用1×PBS或ddH₂O覆蓋細(xì)胞表面，保持細(xì)胞濕潤，然后在鏡下觀察拍照，晾干會導(dǎo)致鏡下脂滴發(fā)黑影響觀察。

Q6

如何對脂質(zhì)染色結(jié)果進(jìn)行分析？

細(xì)胞：細(xì)胞經(jīng)染色和洗滌之后，可以使用純的丙酮或異丙醇等脂溶性溶劑提取出脂質(zhì)結(jié)合染料，然后轉(zhuǎn)移至檢測板中在510-520nm測定吸光度。吸光度與樣品的脂質(zhì)含量成正比，并可間接用于評估脂肪生成。

組織：可以使用圖像分析軟件，對脂滴著色面積進(jìn)行識別計(jì)算，除以總面積從而獲得脂滴含量。